C797S突变是奥希替尼(osimertinib)筛选中出现的主要耐受药物机制-

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摘要

C797S突变是奥希替尼筛选中出现的主要耐受药物机制——超过50%的del19和约40%的L858R。较高浓度的奥希替尼(600或1200nmol/L)的C79

  一线EGFR-TKI耐受药物机制对比

  ENU表示诱变筛选之前,我们选择了克隆Ba/F3细胞窝藏EGFR-del19或L858REGFR-TKIs作为评估高度敏感的筛查。从ENU表示诱变的主要耐受药物机制从吉非替尼(gefitinib)筛查发现+T790M突变,紧随其后的是+野生型(没有额外的表皮生长因子受体的突变),del19L858R,不管吉非替尼(gefitinib)的浓度。相比之下,C797S突变是奥希替尼(osimertinib)筛选中出现的主要耐受药物机制——超过50%的del19和约40%的L858R。较高浓度的奥希替尼(osimertinib)(600或1200nmol/L)的C797S突变很少,而吉非替尼(gefitinib)(gefitinib)的T790M突变在整个浓度中均可观察到。

  使用C797S表达激活突变的Ba/F3细胞进行细胞活力测定,结果显示对奥希替尼(osimertinib)高抗性,对第一代EGFR-TKI处置高敏感性,对第二代EGFR-TKIs(afatinib和dacomitinib)处置中等敏感性。奥希替尼(osimertinib)、gefitinib和afatinib对表达C797S/del19的Ba/F3抑制50%(IC50)值的浓度区别为348.9nmol/L、2.9nmol/L和2.3nmol/L。同样使用表达激活突变的Ba/F3细胞,使用T790M,对奥希替尼(osimertinib)有明显的敏感性,对第一代处置有明显的耐受药物性,对第二代处置有中等敏感性。表达T790M/del19的奥希替尼(osimertinib)、gefitinib、afatinib对Ba/F3的IC50值区别为4.3nmol/L、4238nmol/L、73.9nmol/L。

  这些结果表明,由于T790M激活突变是对第一代和第二代EGFR-TKI耐受药物的相关原理,因此C797S激活突变应该对第三代EGFR-TKI产生耐受药物,并可通过第一代医治加以克服。一些病例报告显示,奥希替尼(osimertinib)耐受药物的患病者使用吉非替尼(gefitinib)可获得临床治疗效果。

  在我们的ENU诱变中,吉非替尼(gefitinib)和奥希替尼(osimertinib)的组合没有引入显示耐受药物性的额外突变。与单药筛选相比,联合医治的耐受药物克隆数量要少得多,这表明这种联合医治在未来可能成为一种有希望的一线医治选择。

  T854A突变介导了C797S/激活突变引发起的阿法替尼(afatinib)耐受药物

  根据一线奥希替尼(osimertinib)处置后C797S出现的结果,我们使用表达激活突变的Ba/F3细胞进行了另一次ENU诱变筛选。另外的T790M(位于cis)突变是C797S对吉非替尼(gefitinib)激活突变的主要机制。T854A突变(位于cis)已经被报告为一个较小的抗耐受药物突变吉非替尼(gefitinib)或埃罗替尼,被发现如今afatinib放映的10%,而40%到60%的耐火材料+T790M克隆,导致multi-TKI-resistant三突变体,能够克服由brigatinibanti-EGFR抗体如前所述。

  获得的克隆与T854A/C797S/activating-mutation显示中间电阻第一代和第二代TKIs和重大敏感brigatinib(95.1nmol/L,72.5nmol/L和27.1nmol/L(IC50与T854A/C797S/Ba/F3细胞activating-mutation吉非替尼(gefitinib)、afatinib、brigatinib)。Westernblotting证实brigatinib抑制EGFR磷酸化及下游讯号通路。虽然afatinib抑制T854A/C797Sactivating-mutationbrigatinib类似的浓度,报告的afatinib血浆浓度大约是50nmol/L60nmol/L,表明100nmol/Lafatinib通常不能在临床环境中实现,而最大浓度的brigatinib人体被报道为2485.9nmol/L。

  C797S/L858R筛选的afatinib也只获得了一个克隆,L792H突变(位于cis)。这种突变未被报道与阿法替尼(afatinib)耐受药物有关;然而,Chenetal.19报道其为奥希替尼(osimertinib)耐受药物,Kobayashietal.37报道其为L792F突变。细胞活力测定和Westernblotting显示,该新突变L792H/C797S/L858R不仅介导对afatinib和奥希替尼(osimertinib)的耐受药物,也介导对brigatinib的耐受药物。这与T854A/C797S突变相反。与其他抑制剂相比,吉非替尼(gefitinib)的治疗效果中等,在细胞活力测定中IC50值为101.3nmol/L,在Westernblotting中抑制下游磷酸化为100nmol/L。

  为了进一步证实T854A的耐受药物性,我们生成了表达T854A/激活突变和T854A/C797S/激活突变的Ba/F3细胞。T854A/激活突变显示对阿法替尼(afatinib)和奥希替尼(osimertinib)保持敏感性,对吉非替尼(gefitinib)具有中等抗性,IC50为50nmol/L至60nmol/L,在细胞活力测定中对brigatinib具有中等敏感性。Westernblotting检查显示TKIs对EGFR磷酸化和下游通路的抑制与细胞活力测定结果相符。

  在临床环境中,T854A/激活突变可能不是主要问题,因为它对阿法替尼(afatinib)或奥希替尼(osimertinib)具有易感性。T854A/C797S/激活突变对奥希替尼(osimertinib)高度难治,对吉非替尼(gefitinib)、阿法替尼(af
C797S突变是奥希替尼(osimertinib)筛选中出现的主要耐受药物机制-
atinib)和brigatinib中度耐受药物,细胞活力测定IC50值约为50nmol/L。L858R的T854A/C797S/激活突变的敏感性低于del19。EGFR磷酸化的抑制和下游讯号的西方墨点法评估T854A/C797S/activating-mutation表达Ba/F3细胞医治表示药品与细胞生存能力分析结果表明brigatinib更强有力的抑制剂对T854A/C797Sactivating-mutation比临床上可用EGFR-TKIs。

  目前,EGFR激活突变患病者的初始医治选择是第一代和第二代EGFR-tkis-吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼或阿法替尼(afatinib),主要由于T790M在大约1年内出现突变而不可避免地失去治疗效果。一线奥希替尼(osimertinib)批准之后,除了主要的C797S/T790M突变外,还产生了T854A/C797S、L792H/C797S三种耐受药物突变。相比之下,吉非替尼(gefitinib)筛选得到的抗性克隆只有C797S/T790M。

  C797S/T790M临床上称为新兴从T790M/activating-mutation奥希替尼(osimertinib)抗性机制,观察在我们ENU表示诱变筛选。不同的耐受药物机制的出现可能导致困难或复杂的医治策略,表明第一代EGFR-TKI治疗方法更preferablein二线C797S/activating-mutation比第二代。C797S突变中断EGFRafatinib的共价结合,作为奥希替尼(osimertinib)观察到,导致C797S/activating-mutation的IC50值接近的可实现的血浆浓度afatinib(48nmol/L-62nmol/L),这是不同于吉非替尼(gefitinib)的IC50值几乎是常数无论C797S的存在;这可能有助于在阿法替尼(afatinib)选择中看到的多样性。奥希替尼(osimertinib)好多钱一瓶?能够在中国的药房购买到吗?详情请扫码咨询:

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