奥希替尼(osimertinib)9291是否会诱导CRC细胞凋亡-

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摘要

为了确定奥希替尼对CRC细胞的影响,我们将HCT15和SW48细胞用延长浓度的奥希替尼处置72h,采用MTS法分析其增殖情况。根据结果,奥希替尼有效地减少了这些

  奥希替尼(osimertinib)减少CRC细胞的增殖,诱导细胞凋亡  

  为了确定奥希替尼(osimertinib)对CRC细胞的影响,我们将HCT15和SW48细胞用延长浓度的奥希替尼(osimertinib)处置72h,采用MTS法分析其增殖情况。根据结果,奥希替尼(osimertinib)有效地减少了这些细胞系的细胞增殖。接下来,我们研究了奥希替尼(osimertinib)是否会诱导CRC细胞凋亡。在凋亡检查中,我们发现10个剂量g/mL奥希替尼(osimertinib)延长了HCT15细胞中Annexinv阳性细胞的数量。我们的研究结果还显示,奥希替尼(osimertinib)诱导HCT15细胞中caspases3和7的激活。凋亡反应在pan-caspase抑制剂z-VAD-fmk预处置后也被发现减弱,提示凋亡反应是caspase依赖性的。此外,奥希替尼(osimertinib)处置延长了HCT15细胞中caspase3和9的活化。以上数据表明,奥希替尼(osimertinib)抑制CRC细胞增殖,诱导细胞凋亡。

  奥希替尼(osimertinib)诱导不依赖p53的PUMA诱导  

  接下来,我们研究了奥希替尼(osimertinib)诱导CRC细胞凋亡的机制。奥希替尼(osimertinib)10mol/mL处置HCT15细胞,检查诱导。奥希替尼(osimertinib)处置HCT15细胞后,蛋白和mRNA水平显著上调,且呈时间依赖性。奥希替尼(osimertinib)也能诱导p53-Knockdown(p53-KD)HCT15细胞中PUMAmRNA的表达。提示奥希替尼(osimertinib)是通过不依赖p53的方法诱导的表达。此外,奥希替尼(osimertinib)也能诱导SW48细胞中的表达。然而,奥希替尼(osimertinib)医治并未上调Bax、Bid和Bim等其他促凋亡Bcl-2家族成员,但减少了抗凋亡蛋白mcl1的表达。这些结果表明,奥希替尼(osimertinib)选择性诱导PUMA,而不考虑p53的状态,并可能介导其抗肿瘤作用。  

  PUMA介导奥希替尼(osimertinib)诱导的细胞凋亡

  接下来,我们研究了是否需要PUMA用于奥希替尼(osimertinib)诱导的细胞凋亡。奥希替尼(osimertinib)诱导的凋亡在PUMAstableknockdown(PUMA-kd)HCT15细胞中显著减少。AnnexinV/PI染色证实了奥希替尼(osimertinib)诱导的PUMA-KDHCT15细胞凋亡的降低。此外,我们的研究
奥希替尼(osimertinib)9291是否会诱导CRC细胞凋亡-
结果显示,奥希替尼(osimertinib)诱导的caspases3/7活化在PUMA-KDHCT15细胞中被阻断。缺乏也阻断了奥希替尼(osimertinib)诱导的线粒体(系统自动过滤词),包括caspases3和9的激活和细胞色素C的释放。我们的结果表明,PUMA对于奥希替尼(osimertinib)在CRC细胞中的抗肿瘤作用是必要的。  

  奥希替尼(osimertinib)诱导的PUMAexpression需要p73  

  接下来,我们分析了奥希替尼(osimertinib)(9291)诱导CRC细胞中PUMA表达的机制。为了进一步阐明诱导机制,我们对几种介导诱导的转录因子进行了研究。由于在奥希替尼(osimertinib)处置后磷酸化/激活未发生变化,FoxO3a不参与其中。由于缺乏诱导,也排除了E2F1和p65。我们发现,在HCT15细胞中,奥希替尼(osimertinib)以时间和剂量依赖的方法诱导p73上调。在HCT15细胞中,siRNA敲除p73后,奥希替尼(osimertinib)的诱导失效。为了确定p73是否能直接激活,我们发现如今奥希替尼(osimertinib)通过ChIP处置后,p73被招募到包含p73结合位点的基因组区域。这些结果表明,在奥希替尼(osimertinib)的作用下,p73直接与启动子区结合,驱动其转录激活。  

  在奥希替尼(osimertinib)医治后,PI3K/AKT讯号通路对p73的诱导是必要的  

  PI3K/AKT通路促进细胞存活,是EGFR讯号通路的下游效应因子。接下来,我们研究了奥希替尼(osimertinib)对与PUMA和p73相关的PI3K/AKT讯号的影响。我们发现奥希替尼(osimertinib)医治强烈抑制了AKT的磷酸化(Ser473)。奥希替尼(osimertinib)处置后,外源性激活AKT抑制的PUMA和p73的表达。这些结果表明,PI3K/AKT通路介导了奥希替尼(osimertinib)通过p73介导的PUMA的表达。  

  PUMA介导奥莫替尼的化学增敏作用 

  在临床研究中,奥希替尼(osimertinib)已与其他化学疗法药品联用。我们推测,由于奥希替尼(osimertinib)(9291)和其他药品同时通过不同途径诱导,诱导可能介导了奥希替尼(osimertinib)的化学疗法增敏作用。因此,联合医治导致HCT15细胞凋亡水平上升,caspase3活化。然而,联合诱导的凋亡和caspase3活化在PUMA-kdHCT15细胞中被消除。这些结果表明,PUMA介导了奥希替尼(osimertinib)的化学敏化作用。奥希替尼(osimertinib)的仿制药物能够在孟加拉碧康和老挝东盟购买到,怎么选购呢?详情请扫码咨询:

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